凝胶层析技术中的主要部件是层析柱,通常采用玻璃管或有机玻璃制成。分离柱的直径大小对分离效果没有影响,若需要使用大样品量,则可以增加分离柱的直径。通常用于制备的凝胶柱直径大于2厘米,在加样时需确保样品均匀分布在凝胶柱表面。此外,随着直径增大,洗脱液量也会增加,导致样品被稀释。
玻璃层析柱的开口较大,加料速度快,无需其他仪器协助,顶部可与其他标准口玻璃器皿连接,但测量不便,底部容易残留液体,层析速度慢且精确度不高,通常用于实验的精度要求较低的情况。
增加压力的柱层析,两端通常采用4F材料,具有耐腐蚀性和耐酸碱性,中间部分有玻璃或有机玻璃材料,需要与蠕动泵结合,以加快层析速度,通过泵将样品注入柱中,若没有泵则会变得困难。目前一般实验室都在使用增压层析柱,在淘宝上也有售。
层析柱和色谱柱没有任何不同。
有色谱带的叫作色谱,准确来说应该称为层析柱,因为现在色带是无色的,但人们习惯称之为色谱柱。
层析柱和色谱柱要说有区别的话,主要是色谱柱只能在色谱仪中使用,而层析柱并不局限于色谱仪的使用。例如溶剂洗脱的柱层析所用的层析柱一般不称为色谱柱。
层析柱和液相柱之间的不同点
1、压力
液相色谱柱(特别是分析性液相色谱):通常承受较高的压力,一般在10-20Mpa。
层析柱通常在常压下运行,或者使用真空泵(约0.1Mpa)。
2、填料
液相色谱柱:颗粒尺寸较小(通常为5-20um)。
柱层分析:粒径较大。
3、分离度
粒径越小,单位长度下理论塔板数越高,这是由第二项决定的。
液相色谱柱的分离能力优于层析柱。
4、效率
液相色谱柱:具有快速分离速度,通常可在一小时内完成。
层析柱:分离时间较长,需超过一个小时。