NH2氨基色谱柱的应用:
需要注意的是,NH2氨基色谱柱的氨丙基键合官能团较C18和C8柱的键合官能团更容易发生水解。因此,在使用时应做好其使用寿命可能较短的心理准备,特别是在反相条件下使用时。
在反相条件下使用时,需特别关注PH值的控制。PH值越低,发生水解的风险就越大;流动相中水的比例越高,同样增加了水解的可能性。因此,在使用后以及准备长时间存放该柱时,进行必要的清洗并将氨基柱保存在纯净的有机溶剂中是很好的维护措施。
在使用NH2氨基色谱柱分析酸性物质如果汁中的糖分时,酸性物质的存在意味着质子的存在,这可能导致略带负电荷的氨基官能团发生质子化。这样一来,经过一段时间的使用后,某些分析物的保留特性可能会发生变化,或者表现为柱效的下降。
NH2氨基色谱柱的清洁方法
1、平时在正常状态下使用:
首先用50倍柱体积的异丙醇进行清洗,由于异丙醇的粘度较高,需适当降低流速;接着,再用50倍的甲醇进行清洗;最后,通过异丙醇过渡回常用的正相流动相即可。
2、通常在反相条件下使用:
缓冲盐需及时冲洗,切勿直接用纯甲醇进行冲洗。这是常识,因此不需要特别说明。
用50倍的纯甲醇进行冲洗;随后,使用异丙醇进行过渡,再用二氯甲烷清洗色谱柱;最后,再用异丙醇过渡回甲醇条件。
除此之外,对于经常分析极性较强样品(如糖类、氨基酸等)的NH2氨基色谱柱,还需要定期进行深度清洁,以去除可能吸附在柱内的杂质。深度清洁步骤如下:首先,使用50倍柱体积的5%乙酸乙酯的甲醇溶液进行清洗,这一步可以有效去除极性杂质;然后,再用50倍的纯甲醇冲洗;接着,通过异丙醇过渡到二氯甲烷进行深度脱水;最后,用异丙醇再次过渡回甲醇,并至少用20倍柱体积的甲醇平衡柱子,以确保柱子状态稳定。
在清洁过程中,务必注意流速的控制,避免过高的流速对柱子造成损伤。同时,每次清洗后都应检查柱压,确保柱子的通畅性。清洁完成后,应将NH2氨基色谱柱保存在纯净的有机溶剂中,并置于阴凉干燥处,以延长其使用寿命。
总之,NH2氨基色谱柱的维护与清洁是保证其分析性能的重要环节。只有严格按照规定的方法进行操作和维护,才能确保柱子的稳定性和准确性,为科研和生产提供可靠的数据支持。