通用反相液相色谱柱的结构:
空柱由柱连接件、柱管和滤片组成。
柱接头采用低死体积设计,由两端螺纹组件组成。一端为7/16英寸外螺纹,另一端为3/16英寸内螺纹。7/16英寸外螺纹与1/4英寸(Φ6.35mm)柱管连接,并在中间置入压环以实现密封。3/16英寸内螺纹则与1/16英寸(Φ1.57mm)连接管相连,中间同样放置压环进行密封。为减少柱外死体积,安装色谱柱时,应将Φ1.57mm连接管通过空心螺钉压环尽量插到底部,然后再拧紧空心螺钉。压环在空心螺钉的挤压下变形,从而紧紧固定在连接管上(连接管通过压环后露出的部分长度需严格控制在2.5mm或其他指定尺寸内)。
在两端的柱接头内,柱管的两端各放置一片不锈钢滤片(或滤网),用于防止柱填料因流动相的冲击而泄漏。整个空柱的组件均采用316#不锈钢材质,能够耐受一般溶剂的作用。然而,由于含氯化物的溶剂对不锈钢有一定的腐蚀性,因此在使用时需特别注意,避免在柱及连接管内长时间存放这种溶剂,以防止腐蚀的发生。
通用反相液相色谱柱的安装方法:
1、打开柱子包装盒,检查色谱柱的型号、规格、生产日期及内部存储的溶剂。
2、将柱两端接头的密封堵头卸下,并放回包装盒以备后用。
3、根据柱管上指示的流动相方向,将色谱柱的入口通过连接管与进样阀的出口相连(如果条件允许,建议在柱前使用保护柱);柱的出口应连接至检测器。所用连接管为外径1.57mm、内径0.1-0.3mm的不锈钢管。连接管的两端配有空心螺钉和密封用的压环。在连接时一定要尽量减少柱外的死体积。连接管在通过空心螺钉和压环时要插到底,然后顺时针方向拧紧空心螺钉,直到无法再拧动为止。接着,用扳手进一步顺时针拧动1/4至1/2圈,注意不要用力过大。如果色谱柱在流动相加压后出现漏液现象,请继续用扳手顺时针拧动1/4圈,直至不再漏液为止。
4、连接完成后,对整个液相色谱系统进行压力测试。首先,缓慢地开启泵,以较低的流速(如0.2ml/min)让流动相通过色谱柱,观察是否有异常声音或明显的压力波动。若一切正常,可逐步增加流速至工作流速,再次检查系统稳定性及柱子的密封性。
5、在进行正式分析前,需对色谱柱进行平衡。根据待测样品所需的流动相组成,配制好流动相并过滤脱气后,以适当的流速冲洗色谱柱,直至基线稳定,无明显波动。此过程有助于去除柱子中可能残留的杂质,确保分析结果的准确性。
6、安装并调试完成后,启动数据采集软件,设置合适的检测参数,如波长、采样频率等,准备进行样品分析。同时,记录下色谱柱的安装日期、使用条件及每次使用后的维护情况,以便追踪色谱柱的性能变化,及时采取必要的维护措施,延长其使用寿命。
7、最后,切记在完成分析任务后,及时清洗色谱柱,避免残留物对柱子造成损害。根据使用的流动相类型,选择合适的清洗溶剂,按照制造商推荐的清洗程序进行操作,确保色谱柱处于最佳状态,为下一次分析做好准备。