液相色谱柱的储存液如果没有特殊说明,通常与评价报告中列出的流动相相同。在使用之前,务必确认储存液与待分析样品的流动相是否可以互溶。在反相色谱分析中,若采用高浓度盐或缓冲液作为洗脱剂,建议先用约10%的低浓度有机相洗脱剂进行过渡,否则缓冲液中的盐分在高浓度有机溶剂中容易析出,可能导致色谱柱堵塞。
液相色谱柱的柱压升高可能由以下几种原因引起。
1、流动相的预处理
杂质堵塞了色谱柱的入口滤片,导致压力上升。这通常是因为流动相没有经过过滤,或者即使经过了过滤,但过滤效果不佳,导致固体杂质滞留在滤板上。
2、样品的沉淀
当溶解样品的溶剂与流动相不匹配时,样品进入色谱柱时可能会因为溶解度下降而出现沉淀,从而导致压力增加。
3、晶体的析出
在使用含有缓冲液的流动相时,缓冲液中的无机盐可能会在系统中留存。由于这些无机盐在新的流动相中的溶解度降低,它们可能会析出,从而导致流体阻力增大和压力升高。
4、细菌或霉菌滋生
霉菌会在流动相、管路或柱子入口处滋生,导致滤板堵塞,从而使压力升高。因此,在使用磷酸盐缓冲液时,通常需现调现用。
5、溶质吸附
当溶质在柱子上的吸附力较强,而所使用的流动相又难以将其洗脱时,未能洗脱的溶质积累会导致阻力增大和压力升高。
6、流动相更换的频率过于频繁。
在更换流动相体系时,不同性质且互不相溶的流动相同时存在于同一体系中,也会导致压力增高。
7、压力脉冲
在运行过程中,有时系统内的压力会出现突然而剧烈的波动。这种压力脉冲可能导致多孔填料的破裂以及柱床结构的细微变化。此外,填料微颗粒的长期积累也有可能增加柱床的阻力,从而引起压力的上升。