正确使用和维护Inertsil色谱柱至关重要,稍有疏忽就可能导致柱效降低、寿命缩短甚至损坏。在色谱操作中,需留意以下事项,以确保色谱柱的维护工作。
1、要避免急剧的压力和温度变化,以及任何机械振动。温度忽然变化或色谱柱从高处掉落都可能影响柱内填料的状况;而压力忽然增高或减低也会影响柱内填充物。因此在调节流速时需缓慢进行,在阀门进样时也不能转动得太快。
2、需要逐步调整溶剂的成分,特别是在反相色谱中,并不宜直接从有机溶剂转变为全水溶剂,反之亦然。
3、一般情况下,色谱柱不宜进行反向洗脱。只有在生产商明确指示柱子可以进行反向洗脱才可这样做,以去除残留在柱头的杂质。若没有明确说明,反向洗脱可能会迅速降低柱效。
4、选择合适的流动相至关重要,尤其是要考虑pH值,以确保固定相不会受到破坏。有时在进样器之前连接一个预柱可以帮助保护分析柱,特别是当分析柱是键合硅胶时。预柱使用硅胶,这样流动相在进入分析柱之前就会被硅胶“饱和”,有效地防止分析柱中的硅胶基质被溶解。
5、避免直接将复杂基质的样品,尤其是生物样品注入柱内,应对样品进行预处理或在进样器和色谱柱之间加装一根保护柱。保护柱一般是填充有相同固定相的短柱,需要定期更换。
6、经常使用强溶剂清洗色谱柱,以去除柱内保留的杂质。在清洗过程中,替换流动相应当逐渐过渡到与原流动相混溶的溶剂,每种流动相的量应约为柱体积的20倍,即一般情况下需50~75毫升。
7、在储存色谱柱时,应该确保柱内充满乙腈或甲醇,同时紧固柱接头,以防止溶剂挥发导致干燥。严禁让缓冲溶液在柱内静置过夜或更长时间。
8、在使用色谱柱时,若遇到压力升高的情况,一种可能是滤芯被堵塞,可考虑更换或清洗滤芯;另一种可能是大分子物质进入柱内,导致柱头受污染;若柱效降低或色谱峰形状失真,可能是柱头发生塌陷,引起死体积增加。