制备柱分离步骤和选择指南

　　制备柱分离步骤和选择指南。制备柱就是高效液相色谱是一种分析方法，制备色谱是一种分离纯化手段。高效液相色谱把普通的色谱柱换成制备柱，就是制备液相色谱，两者的区别在于一种以分析为目的，追求的是检测精度，样品承载量非常小；接下来就来看看制备柱分离步骤和选择指南。

　　一、制备柱分离步骤

　　1、考虑到填料由分析级直接放大到制备级的因素，如果要纯化大量的化合物，需要考虑分析柱的规格和可作为制备柱的填料粒径(10µm或更大)；作为在下一步纯化产品量更大的项目，必须考虑选择更大的填料粒径和更大内径的色谱柱，在与分析柱相同的填料下对产品进行纯化。

　　2、对分析柱(4.6mm内径或更小)选择性的研究，应在多种填料和多种色谱条件下进行选择，可以采用一些商品的液相色谱条件选择软件进行多种色谱模式的比较选择，这样可以缩短分离条件选择的时间。

　　3、在得到最佳的分离条件后，需要对分析柱上样品的承载量进行测试，比较多种上样量下产物的纯度，选择最理想产物纯度的最大上样量。

　　4、选择制备柱的规格，要依据在分析柱上得到的上样量数据，进行放大分离，通常选择与分析柱相同粒径的填料和色谱柱长度来达到推测制备分离的预测。放大制备柱的上样量应基于制备柱和分析柱的交叉截面面积的比值来进行选择。

　　二、制备柱的选择指南

　　第一步：选择合适的填料

　　越小的粒径具有越高的柱效，但是价格更高，并且带来更高的柱压，要求设备的硬件具备更高的压力耐受性。在被测组分的色谱峰与其它色谱峰非常靠近时，就需要更高的柱效，此时较小粒径的色谱填料就显得非常有用。相反，越大的粒径则柱效越低，但价格也相对较低,同时对设备的要求也不高(10um最常用)。

　　第二步：针对蛋白质、多肽类等物质，选择合适的键合相、孔径。

　　由目前市场需求来看，蛋白质、多肽等类的物质分离纯化十分普遍，其中以C18、C8、C4的键合相居多，如何根据物质分子量的大小，来选择合适的含碳量和粒径是个非常重要的问题。而相同粒径不同孔径的效果也有不同，如120A、300A等，因此，孔径的选择也十分重要。

　　第三步：选择合适的柱管。

　　样品的上样要与色谱柱的交叉截面面积相对称，要选择色谱柱的内径要适合于样品的上样量（21.2最常用）。越长的色谱柱具有越高的柱效和更高的样品承载量，但是柱压将会更高，同时分离时间可能会更长（250mm最常用）。

　　以上就是制备柱分离步骤和选择指南，当然制备柱还有更多的操作步骤和知识，这边只是说了一小部分，可以致电研创生物进行咨询了解。