分析一下液相色谱柱常见故障及解决方法

　　液相色谱柱作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正确方式操作的话，就容易导致一些棘手的小问题。其中常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题，今天和大家一起分析一下液相色谱柱常见故障及解决方法。

　　【液相色谱柱系统】液相色谱柱主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。

　　常见问题及解决方法

　　一、柱压问题

　　柱压问题是使用液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在345kPa以内或在50PSI之间(在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的)。压力过高、过低都属于柱压问题。

　　1压力过高这是液相在使用中常见的问题，指的是压力突然升高，

　　1、一般都是由于流路中有堵塞的原因。此时，我们应该分段进行检查。

　　(1).首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检查；

　　(2).打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。如果压力降至100PSI以下，过滤白头正常，在检查；

　　(3).把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以尽量少用。问题无法解决可考虑更换色谱柱。

　　2、流速设定不正确：可重新设定正确流量。

　　3、流动相配比不正确：不同配比的流动相其黏度系数不相同，较高黏度的流动相相应的系统压力也大，如果可能可更换黏度较小的溶剂或重新设定配比。4、系统压力零点漂移：调节压力传感器的零点。

　　2压力过低

　　1、一般是由于系统泄漏，处理方法：寻找各个接口处，特别是色谱柱两端的接口，把泄漏的地方旋紧即可。拆下柱子加适当力拧紧或衬四氟薄膜。

　　2、泵里进了空气，但此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低，更严重一点会导致泵无法吸上液体。处理方法：打开Purge阀，用3~5ml/min的流速冲洗，如果不行，则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。

　　3、无流动相流出：检查储液瓶中有无流动相，沉子是否浸在流动相中，泵是否运行。

　　4、参比阀未关闭：将流速降低后关闭参比阀。一般降至0.1～0.2mL/min后关闭参比阀。

　　基线问题

　　1基线漂移基线漂移是色谱工作者普遍遇到的问题,在实际工作中,我们经常能遇到基线漂移的情况,特别是在梯度洗脱的时候,基线漂移是常有的事。一般说来，机器刚起动时，基线容易漂移，大概要30min的平衡时间，如果你用了缓冲溶液或缓冲盐，还有就是在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长，但如果你在实验过程中发现基线漂移，则你要考虑下面的原因：

　　1、柱温波动控制好柱子和流动相的温度，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。

　　2、(即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。)控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器。

　　3、流通池被污染或有气体用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池(应该断开柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。

　　4、紫外灯能量不足更换新的紫外灯

　　5、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。

　　2基线噪音

　　对于紫外检测器,氘灯光源打开后要预热30 min以上,基线才能稳定。噪声是指与被测物无关的检测器输出信号的随机扰动变化,分短期噪声和长期噪声两种。

　　氘灯用的过久,接近寿命期时(氘灯的寿命约1 000 h),会使基线噪音明显增加,应及时更换氘灯。除光源外,流路中的气泡也会产生噪音。对于判断基线噪声增大是由于光源灯的老化还是来自流路中的气泡的问题,可将泵关上,继续走基线,如果噪声立即停止,基线呈一条直线,说明基线噪声来自流动相中的气泡,应设法排气；若停泵后仍有噪音出现,应考虑是灯的问题。

　　基线噪音(规则的)

　　产生基线噪音的原因有：在流动相、检测器或泵中有空气；漏液；流动相混合不完全；温度影响(柱温过高,检测器未加热)；在同一条线上有其他电子设备；泵振动。

　　了避免基线噪音,在正式进样之前,需要对流动相脱气；冲洗系统以除去检测器或泵中的空气；检查管路接头是否松动；泵是否漏液；是否有盐析出和不正常的噪音,如有必要,更换泵密封；用手摇动使溶剂混合均匀或使用低粘度的溶剂减少差异或加上热交换器；有其他电子设备时断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正；泵振动时在系统中加入脉冲阻尼器。

　　基线噪音(不规则的)

　　(1)漏液：检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换密封,检查流通池是否漏液。

　　(2)流动相污染、变质或由低质溶剂配成：检查流动相的组成。

　　(3)流动相各溶剂不相溶：选择互溶的流动相。

　　(4)检测器/记录仪电子元件的问题：断开检测器和记录仪的电源,检查并更正。

　　(5)系统内有气泡：用强极性溶液清洗系统；检测器内有气泡,清洗检测器,在检测器后面安装背景压力调节器。

　　(6)流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音):用硝酸清洗流通池；

　　(7)检测器灯能量时不足更换灯；

　　(8)色谱柱填料流失或阻塞:更换色谱柱。

　　(9)流动相混合不均匀或混合器工作不正常:维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,不建议使用泵的混合装置。