色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类。多为金属或玻璃制作。有直管形、盘管形、U形管等形状。液相色谱通常均采用填充柱。今天就来和大家一起聊一下关于色谱柱的常见问题吧。
液相色谱柱柱压升高
造成柱压升高的可能原因有很多。一般是由于色谱柱筛板或柱头发生了堵塞,造成流动相阻力加大所引起。当然色谱系统其他部分发生堵塞,也可能表现为柱压(系统压力)升高。所以在发现系统压力升高时,可首先使用两通短接色谱柱观察相同条件下系统本压是否正常,排除压力升高为系统其他部分造成。
色谱柱筛板堵塞
这往往是由于流动相没有过滤,或虽已过滤但滤膜孔径过大或滤片损坏,使固体杂质滞留在筛板上造成的。可采用反冲的方法去除堵塞物。对于5或3.5um填料的色谱柱,建议采用0.45um膜厚过滤样品,1.8um填料的色谱柱,请采用0.2um膜厚过滤样品。
同样类似堵塞也会发生于排气阀过滤芯、在线过滤器和保护柱,这时建议更换滤芯,在线过滤器内的筛板或保护柱内的柱芯。
非特异性吸附
当部分组分在柱子上有较强的非特异性吸附,且当前所用的流动相难以将它们洗脱时,强保留组分的累积则会造成阻力增大和压力升高。可使用适当的溶剂冲洗以除去吸附物质。
样品的沉淀
当样品所用的溶剂与流动相不一致时,样品进入柱中时有可能因溶解度降低而沉淀出来,造成压力升高。此时建议使用对样品有较高溶解度的溶剂冲洗。
盐晶体的析出
使用较高浓度的缓冲液或添加有缓冲液的流动相后,如果冲洗不彻底,缓冲液中的无机盐成分可能会残留在体系之中。它们会因在新流动相体系中溶解度降低而析出,造成流动相阻力加大,压力升高。
更换流动相时置换不彻底
当改换流动相体系时,不彻底的更换使不同性质、互不相溶的流动相存在一个体系中,也会造成压力升高。可使用混溶的溶剂(异丙醇)彻底冲洗。