1、柱温的波动会导致基线的变化。即使是微小的温度变化,也可能对示差检测器、电导检测器、灵敏度较低的紫外检测器或其他光电检测器产生影响。
解决方案:调节柱子和流动相的温度,并在检测器前安装热交换器。
2、流动相不均匀。(由流动相条件变化引起的基线漂移大于由于温度变化所导致的漂移。)
解决方案:采用HPLC级别的溶剂、高纯度的盐和添加剂。在使用流动相之前需进行脱气,并在使用过程中配合氦气。
3、流通池受到污染或存在气体。
解决方案:使用甲醇或其他强极性溶剂对流通池进行冲洗。如有需要,可以使用1N的硝酸。(请勿使用盐酸)
4、检测器的出口被堵塞。(高压导致流通池窗口破裂,产生噪音基线)
解决方案:移除堵塞物或更换管道。请参考检测器手册,进行流通池窗的更换。
5、流动相的比例不合适或流速发生变化。
解决方案:调整配比或流速。为防止出现此问题,可以定期检查流动相的成分和流速。
6、柱子的平衡速度较慢,尤其是在流动相发生变化时。
解决方案:使用适中浓度的溶剂进行清洗。在更换流动相时,分析前应使用10-20倍体积的新流动相对色谱柱进行冲洗。
7、流动相受到污染、发生变质或使用低品质的溶剂配制。
解决方案:检查流动相的成分,使用高品质的化学试剂和HPLC级别的溶剂。
8、样品中含有强烈保留的物质(高K’值),这些物质通过洗脱馒头峰样而被分离出来,导致基线逐渐上升。
解决方案:可采用保护柱,并在进样之间或分析过程中定期使用强溶剂对柱子进行冲洗。
9、使用循环溶剂,但检测器的设置尚未调整。
解决方案:重新调整基线。当检测器的动态范围发生变化时,需使用新的流动相。
10、检测器未设置在最大吸收波长上。
解决方案:首先,确认目标化合物的最大吸收波长,并调整检测器的波长设置以匹配。若化合物具有多个吸收峰,选择信号最强且基线稳定的波长。同时,检查光路是否畅通无阻,确保检测器窗口干净无污物,必要时进行清洁。此外,对于使用可变波长检测器的系统,建议定期进行波长校准,以确保检测准确度和基线稳定性。若调整后仍存在问题,考虑更换更高灵敏度的检测器或优化色谱条件,如调整流动相组成、流速或柱温,以进一步改善基线表现,确保HPLC分析的准确性和可靠性。