C18反相液相色谱柱的维护及操作步骤

C18反相液相色谱柱的保养与维护

1.C18反相液相色谱柱的平衡过程

c18反相液相色谱柱在测试后应储存在乙腈和水的混合溶液中。新柱使用前需用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈进行冲洗。务必确保分析样品所用的流动相与乙腈/水能够互溶。每天要花足够的时间用流动相来平衡c18反相液相色谱柱。

C18反相液相色谱柱的操作步骤如下：

a.在平衡开始时，逐渐提高流速，用流动相对色谱柱进行平衡，直到得到稳定的基线（如果缓冲盐或离子对试剂的流速较低，平衡所需的时间可能会更长）。

b.如果流动相中含有缓冲盐，则需要注意用纯水进行过渡。在每天的分析开始之前，必须先用纯水冲洗30分钟以上，然后再用含缓冲盐的流动相进行平衡；分析结束后，也必须先用纯水冲洗30分钟以上，以去除缓冲盐，然后再用甲醇冲洗30分钟，以保护柱子。

2．C18反相液相色谱柱的恢复

长期使用的C18反相液相色谱柱，通常会导致柱效下降（理论塔板数减少）。可以对C18反相液相色谱柱进行再生，建议在具备条件的实验室中，使用一台经济实惠的泵进行柱子的再生处理。

具体再生步骤如下：首先，用高浓度的有机溶剂（如纯甲醇或乙腈）以较低流速冲洗柱子数小时，以去除可能积累的杂质和污染物。随后，改用一种温和的酸性或碱性溶液（如0.1M的磷酸或氢氧化钠溶液，需根据柱子耐受性选择），同样以低流速冲洗数小时，这一步旨在中和并去除可能吸附在柱子表面的残留物。完成酸碱处理后，务必再次用高浓度有机溶剂冲洗，彻底洗净酸碱残留，恢复柱子至中性环境。

此外，定期进行反向冲洗也是保持柱子性能的有效手段，但需注意不是所有柱子都支持此操作，操作前务必查阅柱子说明书。反向冲洗时，使用与常规方向相反的流动相，以轻微松动并去除柱内可能堵塞的颗粒。

最后，每次使用完毕后，除了上述的冲洗步骤，还应确保色谱柱内充满适宜的保存溶剂，并存放在阴凉干燥处，避免温度和湿度的剧烈变化，这些都能有效延长C18反相液相色谱柱的使用寿命，确保其持续提供高质量的分离效果。