液相色谱柱维护的“八大”误区，你知道吗？

常规思维中，色谱柱上标示的流向是不可改变的，每次使用都要遵循。可是，大家有没有想过这个方向的作用是什么呢？为什么要标示一个使用方向呢？

原因很简单：其实色谱柱前后端的填料及填装工艺都是一样的，标示方向的目的就是让我们在使用中记住流动相从哪个方向流入色谱柱，那么这个流入端就是最先污染端。这样就为我们日后维护或再生色谱柱做了准备，而我们需要遵循这个规定应该在色谱柱开始做样后。

液相色谱柱作为比较昂贵的色谱耗材，也具有很多特性，如果不了解这些注意事项，一不留神就会用坏。

而且色谱柱的内部保存的溶剂是十分重要的，溶剂一般应具有低粘度、高纯度、化学稳定性好对样品有合适的极性和良好的选择性、与检测器兼容性强、低毒等特征。所以色谱柱内部保存着什么溶剂一定要知道并且清楚，为此使用前，一定要看色谱柱的说明书，其中也包括说明书上建议的维护保养规定。

对于常规色谱柱如C18色谱柱而言，在短时间内用纯水冲洗，通常不会对色谱柱造成较大的损伤，但如果长时间用水冲洗色谱柱则可能引起固定相流失和相塌陷现象，所以若非必要请尽量避免用纯水冲洗色谱柱，建议在水中加入一定量的甲醇或乙腈进行冲洗，通常水的含量<90%不会对色谱柱造成影响。

相较于常规色谱柱，多糖型手性色谱柱能耐受的水相比例较低，在反相系统中，最高的水相比例一般不超过60%，但环糊精型手性色谱柱反相流动相允许的最高有机相比例为90%。

此外，使用强溶剂冲洗色谱柱对内部填料的损伤是非常大的，尤其是纯水，除非色谱柱是耐水的，冲洗色谱柱最好的方法是用流动相比例的水系和有机系来冲洗。如果认为流动相比例无法把色谱柱冲洗干净或者此比例中有机系占有比例过大，可以使用水含量为90%的有机系来冲洗。

柱子类型不同，保存溶剂也会不一样，具体要看说明书。对于反相柱，一般用甲醇(乙腈)保存，也有用80%左右甲醇浓度的甲醇/水保存的。一般用流动相平衡冲洗10-20个柱体积即可(注意：柱体积不等于空柱管体积，4.6x250mm的色谱柱空柱管体积是4.15ml，而柱体积只有约2.5ml)。

在接入色谱柱时，须先用合适的溶剂冲洗流路（包括流通阀、定量环和自动进样器），部分溶剂（如丙酮、氯仿、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙酸乙酯、二氯甲烷和四氢呋喃等强溶剂）会破坏涂覆型手性固定相的结构，因此不得使用它们作为流动相或溶剂溶解样品。

由于液相色谱柱需要活化，且内部保存的有机系具有挥发性，因此在使用前还是应该用小流速的和色谱柱内部相同的溶剂冲洗一定的时间。

不同的色谱柱会有不一样的保存条件：例如研创的EnantioPak® R-C是键合型手性柱，正反相体系均适用，并且需要注意专柱专用，正相色谱柱在使用含酸/碱添加剂的正相流动相后，需用正己烷/异丙醇=90/10冲洗色谱柱50 min，然后用正己烷/异丙醇=90/10封存；而反相色谱柱在使用含酸/碱添加剂的反相流动相后，需用乙腈/水=90/10冲洗色谱柱50 min，然后用乙腈/水=90/10封存；使用含缓冲盐流动相后，需要用不含缓冲盐同比例流动相冲洗色谱柱30min，然后用乙腈/水=90/10封存。

此外，由于色谱柱内部保存液具有挥发性，因此为了减少其挥发速度，可以添加5%-10%的水，这样的话可以在一定程度上减少一些有机系的挥发。如果再增加一个保险，可以在堵紧堵头后，再用封口膜封起来。

比较脏的样品分析，比如含蛋白的血液体液样品、高糖的柿子等水果、以及色素含量高的样品，严重的可以导致色谱柱完全堵死。这时候，可以将色谱柱前段的筛板拆卸，超声清洗。

液相色谱柱的日常使用，除非样品处理效果特别好，不然在一般情况下，保护柱对样品分析效果不影响显著的情况，色谱柱前段增加保护柱，并根据色谱柱增加保护柱之后柱压的增幅，定期更换保护柱柱芯。

填装色谱柱的技术会严格的要求，如果没有专业的仪器和正确的操作方法是不建议自行装柱的，要把色谱柱维修好的可能性几乎为零。

异丙醇是一个非常好的作为中间步骤的溶剂，因为它能与正己烷或二氯甲烷互溶又能与水相溶剂互溶，但是异丙醇粘度非常大，必须确保较低的流速以免使泵压过高。冲洗色谱柱时，冲洗液由色谱柱出液端直接接入废液瓶，不能流经检测池，以避免检测池被污染。