在液相色谱分析中，改善峰形与提升分离度是确保分析结果准确性和可靠性的关键步骤。今天小研为大家整理了液相改善峰形与提升分离度相关的知识，仅供大家参考~
- 对于常规色谱柱，一般先用90%的乙腈（或甲醇）/水（或缓冲溶液）进行试验，这样可以快速地得到初步的分离结果。
- 而对于手性色谱柱，在正相模式下可以先用正己烷:异丙醇（或乙醇）=70:30比例进行快速分离；在反相模式下可以用90%的乙腈（或甲醇）/水进行试验，得到初步的出峰结果。
- 根据出峰情况，逐步调整有机溶剂（乙腈或甲醇）的比例。每减少10%的有机溶剂量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。
- 低粘度：粘度应低于2cp，高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，增加柱压降，延长分离时间。
- 与检测器兼容：例如，使用UV检测器时，流动相在检测波长下应无吸收或吸收很小。
- 纯度：流动相中的杂质可能在色谱柱上积累，影响色谱柱的寿命和分离效果，建议尽量使用色谱纯的溶剂对样品进行分析。
- 对样品的溶解度适宜：如果溶解度不佳，样品会在柱头沉淀，影响分离效果和色谱柱性能。
- 对于弱酸（4≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品，采用反相离子抑制技术，通过调节流动相的pH值来抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，从而改善峰形。
- 流动相中加入适量的弱酸、弱碱或缓冲盐溶液（如醋酸、三乙胺、磷酸盐缓冲液等），以控制流动相的pH值。
- 根据样品的性质和分离要求选择合适的色谱柱类型如常规色谱（如C18、C8柱等）和手性色谱柱等，选对色谱柱往往可以实现事半功倍的效果。
- 适当的流速可以提高分离效率，但过高的流速可能导致峰形展宽和分离度下降。
- 柱温对分离效果也有影响，适当提高柱温可以加快溶质在色谱柱中的传质速度，但也可能导致某些组分的热降解，应当充分考虑样品的稳定性等因素。
- HPLC所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作、柱的分离效率以及检测器的灵敏度和基线稳定性。
- 常用的脱气方法有加热煮沸、抽真空、超声、吹氦等。超声脱气是一种较为简便有效的方法，但需注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触以防破裂。
- 所有溶剂使用前都必须经过滤以除去杂质微粒，即使是色谱纯试剂也不例外（除非标签上标明“已滤过”）。
- 分清有机相滤膜和水相滤膜的使用范围，避免滤膜溶解导致溶剂污染。
- 在调整流动相比例和pH值时，应逐步进行并注意观察峰形和分离度的变化。
- 确保实验室环境整洁、温度湿度适宜以减少外部因素对实验结果的影响。
通过以上方法和策略的综合运用，可以显著改善液相色谱分析中的峰形并提升分离度，从而获得更加准确和可靠的实验结果。
地址：广州市黄埔区揽月路3号国际企业孵化器F座310
电话：18922204815 
传真：020-84418344
邮箱：mzzhang@chiral-se.com
