如何判断液相色谱仪是否被污染以及携带污染类型、发生原因和减少方法

当液相色谱仪被污染之后，就会出现数据错误等问题。今天，我们就和大家一起探讨一下，如何判断液相色谱仪是否被污染以及系统 (HPLC) 中“携带污染”（或俗称“残留”）发生的原因和减少的方法。

柱压变化影响较小，除非是检测池太脏，堵塞严重，会对柱压产生小于1000psi的影响（一般的用到光的检测池也就耐这么高的压力），但这种情况不会持续发生，给你排查的时间有限，堵的时间长了，会爆池，压力也就没有影响了。

峰面积应该是变小。检测池脏时会有两种情形影响检测灵敏度。一方面是基线噪声变大，从整体上影响信噪比。另一方面，检测池脏了对于光检测原理的检测器来说（UV、PDA、DAD、FLD、ELSD）首先会减弱通过检测池的光强度，光强度降低了，灵敏度就会下降，相当于检测器光源的能量降低。

许多老式自动进样器设计使用低压进样器，这些进样器需要单独的清洗瓶，因为它们不需要持续清洗。清洗瓶中应注入流动相或溶液，以溶解系统中可能残留的任何物质。如果使用的是现代高压“直通式 ”自动进样器，则很少会出现携带污染问题，因为这些现代进样器使用高压泵将样品吸入并直接注入流动流路，从而减少了对任何清洗阶段的需求。

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注：对于多次穿刺的小瓶，必须更换隔膜或使用密封时间足够长的隔膜材料，以减少这种影响。擦拭隔膜针可消除部分污染。这个问题会造成两种污染。(a)当针头浸入同样有一个大隔膜开口的样品瓶（相同或不同的样品瓶）时，针头会带着一些样品沉积到新的样品瓶（或样品瓶的隔膜上）。(b)污染物还可能顺着针头本身流下，在进样时滴到针座上，造成针座或样本污染。

减少针头外部污染的最简单的解决方案之一，就是在洗瓶中加入一种溶液，这种溶液经过优化，可以快速将样品溶解到溶液中。这听起来很简单，但许多色谱分析人员选择的清洗液根本无法提高洗针的清洁度。例如肽、蛋白质、脂肪、油类和/或脂类等样品可能很麻烦，因为它们的溶解性可能与所选的流动相不符；流动相通常是理想的，但在某些情况下却不起作用。这些清洗瓶必须经常更换（只需在系统中设置多个清洗瓶位置即可）。此外，每次使用清洗瓶时都应将瓶盖关闭，以减少吸取污染（此步骤至关重要）。

大多数自动进样器阀门，依靠旋转密封将样品从针环路转移到系统的流路中。这些阀门内的部件会磨损，应至少每6个月检查一次，必要时更换。此外，还应经常检查针座和针是否有磨损或泄漏的迹象。

注：查看进样器是否有泄漏迹象。泄漏总是表明存在问题，应立即解决。有泄漏时不要进行进样。您的方法和获得的数据将无效。应更换任何磨损的部件并测试系统性能。造成样品携带污染的最常见原因之一是：样品注入阀旋转密封磨损。磨损的密封件会使样品在两次进样之间滞留在其空间和凹槽中，导致在随后的分析中出现样品色谱峰。此外，缓冲盐也会滞留在密封件之间，造成泄漏或携带污染。例行的 HPLC 维护以及每天冲洗所有缓冲液/盐（如适用）可消除这些问题。

良好的色谱分析需要全面了解所使用的硬件和HPLC的基本原理。您必须能够对系统的完整流路和方法开发中使用的色谱概念进行故障排除，通过指导，采用合理的步骤来学习。