死体积
在使用液相的过程中,我们一听到死体积就会想到:死体积会导致峰展宽,分离效果自然就会受到影响了。
图片来源于网络,侵删
死体积的定义
死体积(Dead Volume,V₀):由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分:进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙(被流动相占据,Vm)、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与色谱平衡过程,其它三个部分只起峰扩展作用。为防止峰扩展,这三个部分体积应尽量减小。
死体积的测定
死体积通常需要通过实验进行测量,常用方法是通过进一针和色谱柱固定相没有任何作用的样品(如尿嘧啶)时,就会得到一个色谱峰,由此峰可以测得死时间(t₀)。然后将该值乘以流速(F)换算为体积。
即:死体积(V₀) = 死时间 t₀×流动相的流速 F
减少死体积的方法
减少死体积的办法主要包括减少连接管路的长度,缩小连接管路的直径,用死体积小的检测池,用粒度小的色谱填料。
另外在我们使用或维护的过程中,如果涉及管路等配件的更换,应该选择与原规格一致的配件,以确保死体积与原来一致,避免死体积的增加而带来峰形的展宽。接装色谱柱时,需确保管线接头匹配完好(特别注意peek管接头的使用)避免形成接头空腔(下图)。
(左图为peek管接头)图片来源于网络,侵删