干货 | HPLC峰型问题之分叉峰原因分析

栏目：行业资讯 发布时间：2023-10-07
在HPLC中，色谱峰的顶端出现分叉的峰叫做分叉峰，分叉峰的出现与样品的进样量和色谱柱等因素有关。
在HPLC中，色谱峰的顶端出现分叉的峰叫做分叉峰，分叉峰的出现与样品的进样量和色谱柱等因素有关。

分叉峰

分叉峰原因及解决方法




溶剂效应

原因：大体积进样，导致样品产生的峰过早的洗脱出色谱柱，从而导致分叉峰。
解决方法：对样品进行蒸发浓缩，从而减少进样体积；或者进样溶剂改为用水稀释，与流动相更为兼容，即使进样体积较大也不会出现峰变形。较早流出的峰或靠近溶剂前沿的峰更容易出现拖尾。在液相色谱中用溶于流动相的小体积进样最为理想。
注意：样品要现配现用，避免样品溶解液的有机相比例、pH值发生变化而导致的溶剂效应



色谱柱筛板堵塞

原因：色谱柱的进出口的筛板堵塞，样品进入色谱柱时会受阻，液体流动受阻形成延迟，使得样品在相中停留时间变长，从而使峰型拖尾。
解决方法：
配置流动相时污染流动相使用色谱纯溶液，现配现用，并通过4.5um滤膜过滤后方可使用。
型号规格插口不匹配，在扭紧的时候造成形变而促使管道阻塞。色谱柱有物理损坏是会造成峰形拖尾。唯一的解决方法就是更换新柱。
样品存在杂质，导致堵塞在筛板处，过滤样品
应用较高浓的缓存盐溶液，在关机时将会在出入口端结晶体成块并导致阻塞。
适当降低温度，让试剂溶解得慢一些。
如以上方法都不能解决堵塞问题，则需考虑换一根新的色谱柱。



保护柱或色谱柱污染

原因：复杂的样品基质容易造成保护柱阻塞或污染，进而产生色谱峰分叉的现象。色谱柱在开始使用时没问题，而使用一段时间后出现峰分叉的现象，很可能是由于色谱柱阻塞或者被污染引起。
解决方法：取下保护柱再进行分析，如有必要可更换保护柱。如果色谱柱阻塞，拆下来清洗，如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，建议将更换色谱柱。



色谱柱塌陷

原因：色谱柱通常都有其适用的pH、温度范围，若使用不当会造成色谱柱填料塌陷，从而导致色谱峰分叉。
解决方法：由于色谱柱塌陷引起的色谱峰分叉很难修复，建议更换新的色谱柱。


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