干货 | HPLC峰型问题之鬼峰原因分析

栏目：行业资讯 发布时间：2023-09-25
鬼峰(Ghostpeak)：是对未知来源的色谱峰的统称。色谱分离过程中，特别是在梯度洗脱或者仪器使用时间过久容易产生时有时无的色谱峰，因此鬼峰最大的特点就是“飘忽不定”，“神出鬼没”。

鬼峰(Ghostpeak)：是对未知来源的色谱峰的统称。色谱分离过程中，特别是在梯度洗脱或者仪器使用时间过久容易产生时有时无的色谱峰，因此鬼峰最大的特点就是“飘忽不定”，“神出鬼没”。

鬼峰

鬼峰是液相色谱中最常出现的问题之一，鬼峰来源多种多样，理论上讲，在HPLC系统中任何一个节点均有可能引入鬼峰，依据鬼峰出现的频率，其主要来源于流动相中含有杂质、管路中样品有残留、仪器问题以及操作不当等。

鬼峰原因及解决方法




流动相中含有杂质

原因：

  1. 盛放流动相的容器受到污染，导致流动相污染，这种污染可能来自于洗涤剂或是其他实验人员用完后的残留杂质；
  2. 测量流动相pH时，很多pH计以聚碳酸酯作为外壳，然而聚碳酸酯是可以溶于有机溶剂的；
  3. 流动相在空气中暴露时间过长，就可能吸收空气中的有机杂质，有时流动相中的添加剂，例如TFA，时间长了会氧化从而产生杂质。
解决方法：

  1. 流动相容器的清洗一般用干净的水+有机溶剂涮洗就行，过多的清洗步骤反而可能造成二次污染。（有时流动相容器的塑料盖碎片都有可能是杂质的来源）；

  2. 尽量使用玻璃pH计来测量流动相的pH；
  3. 流动相尽量现配现用。



管路样品残留

原因：

  1. 连续进样，在某个位置出现忽高忽低的峰，最可能是进样针污染；

  2. 分析样品时峰没出完，鬼峰在下一针或下下一针出现；

  3. 由于长时间的使用含水量较高的流动相（尤其是加入缓冲盐的），细菌就容易在管路中滋生，细菌的代谢产物或是细胞碎片能造成鬼峰。

解决方法：

  1. 定期将进样针取下来进行检查，需要时请进行手动清洗，如清洗无效，更换进样针。

  2. 延长分析时间,计算可能出现的保留时间,调整流动相。

  3. 定期检查管路，定期清洗管路(注意不要损坏柱和管道系统)或更换新的。




气泡

原因：

  1. 如果有小气泡通过流通池，也出现随机的假峰；

  2. 大气泡存在，也出现随机的假峰。

解决方法：对流动相进行脱气




温度

原因：

  1. 进样时，温度过高会导致样品碳化、隔膜分介；

  2. 温度过低，样品过冷，在进样口停留时间太长造成吸附现象。

解决方法：

  1. 进样时，进样口温度过高时，降低进样口温度；

  2. 温度过低时增高进样口温度，加大载气流速赶去吸附物。


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