C18色谱柱两种pH环境的选择方法

C18色谱柱的孔径，改进的选择性.吞吐量.灵敏度和键合能力非常适合生物分子的分离分析。适用于亲水性较强的蛋白质分离。

C18色谱柱的pH环境选择：

对于传统pH使用范围一般为2~7，因为pH值高于8时C18固定相会受到限制。由于残留硅羟基的存在，容易对碱性化合物造成不可逆的吸附，造成峰尾，影响分离分析。pH如果值太低，键合烷基就会脱落，成分的分离也不能满足要求。

1.碱性条件下C18的选择

化学键合相一直是研究的热点。

每个硅烷化分子中含有两个硅原子，两个硅原子之间有两个硅原子-O-或-CH2-CH2等基团连接，每个硅原子含有一个C18官能团。其环状结构无论在低位都是低的pH在价值条件下，还是高的pH稳定性高，柱效满意。

与传统的单齿化学键合相比，这种化学键合固定相的突出优点是低.中.高pH值时稳定性好。

在开发普鲁卡因相关物质的药物分析方法中，对比8种色谱柱，选择耐受性pH色谱柱大值范围的色谱柱。分析样品和杂质均为碱性，使用时使用。C18使杂质与成分之间的分离更好。如果碱性物质之间的分离效果不好，可以考虑使用上述键合相填料。

2.酸性条件下C18的选择

为了改善低色谱柱pH值时的稳定性，有人提出了空间位阻的方法。

空间位阻作用是指连接大基团，阻碍溶质基团攻击硅醇基，使硅氧烷再生，提高化学键固定抗水解能力。

其他人在侧链中制备了异丙基或异丁基C18化学键合固定相。由于固定相引入了较大的侧链基团，三维阻碍了残留硅醇基和溶质之间的相互作用，在低中pH这种化学键合固定相更适合酸性物质的分离。

C18色谱柱采用空间位阻技术，采用单官能团硅烷，二异丁基侧链基团较大，空间位阻关键硅氧烷键与硅胶表面相结合，避免低pH在酸性流动相条件下，水解破坏提供了良好的稳定性和重现性。StableBond色谱柱变低pH值方法开发的首选。在方法开发初期，如果选择流动相为酸性，可以将这种色谱柱作为首选。