影响手性色谱柱寿命的几个因素主要包括:流动相、样品等因素。在使用色谱柱时,应注意这些因素,以有效地提高使用寿命。
一.流动相因素
1.流动相pH
不同基质的填料有不同的pH适用范围。常温下不定形硅胶在纯水中的溶解度约为100mg•L-1,且在pH1~9范围内溶解的硅胶量几乎为常量。考虑到溶解速度的影响,硅胶基质填料能承受的流动相pH范围约为1~8。由于键合层的屏蔽作用,键合相硅胶填料大大提高了填料对流动相的适应性。如今,广泛使用的反相色谱填料C18(十八烷基硅烷键合硅胶)pH适用范围可达2~10。当流动相时。pH当值超过酸性范围时,键合容易水解流失;当流相相流动时,pH当超过碱范围时,会加速硅胶的溶解,释放絮状物阻塞柱。这两种反应都是不可逆的,尤其是在高温下(>40℃)在环境中,柱效会迅速降低并报废。
2.流动相变质
目前使用最广泛的是硅基键合相填料。当溶液作为流动相或流动相中含有一定浓度的磷酸盐缓冲液时,一些细菌或霉菌会在溶液或缓冲盐溶液中生长,从而阻塞固定相颗粒之间的间隙。特别是对于多自动比例混合的高效液相色谱仪,由于储存时间长,水相或缓冲盐相容易单独储存。
3.流动相纯度
目前广泛使用的填料颗粒粒范围为3~10μm,孔径在6~10nm,色谱柱在使用过程中会有大量的流动相通过。如果流动相含有少量不溶性杂质颗粒,很容易在柱头位置被截流。从长远来看,它会导致色谱柱反射阻塞,导致柱压升高,无法正常使用。
4.其它因素
例如,流动相的极性也对柱有一定的影响,甲醇.水.极性物质如冰醋酸会损坏硅胶填料柱、正丁醇等.二氯甲烷等极小物质会损坏硅胶柱,碱性溶液会损坏阳离子交换树脂色谱柱,酸性溶液容易损坏阴离子交换树脂柱。
二.样品因素
1.样品溶解性
样品样品在准备过程中,如果少量颗粒未能完全溶解,则会与样品一起进入色谱柱,也会沉积在柱头,导致色谱柱堵塞。
2.样品纯度
样品中可能含有待分析成分以外的各种成分或杂质,可能在柱内产生不可逆吸附,从而覆盖固定相的活性点,改变保留特性。
3.样品的化学性质
待检测样品中的各种成分与填料之间应具有化学稳定性。典型的是使用氨基键合柱时,应避免使用含有碱的化合物和流动相,如甲苯.乙酸丁酯等,以防固定相中NH2和酐.酮发发希夫(Schiff)固定相因收缩而损坏。
三.影响手性色谱柱产品寿命的其他因素
手性色谱柱使用寿命的影响因素很多,除了流动相和样品因素外,还有其他外部因素,如柱压、温度、色谱柱正确清洗、色谱柱正确安装等。