常见的高效液相色谱问题及处理方法

常见的高效液相色谱问题及处理方法包括：柱压、液漏、谱图等，研创生物小编为您提供完善的解决方案。

一.柱压

(1)柱压过高

柱压过高是HPLC柱客户最常遇到的问题。原因有很多，往往不是柱子本身的问题。您可以按照以下步骤检查问题的原因。

1.拆下保护柱，看柱压是否还高，否则就是保护柱的问题，如果柱压还高，再检查一下；

2.把YMC从仪器上取出色谱柱，看压力是否降低，否则管道堵塞，需要清洗，如果压力降低，再检查；

3.将柱子的进出口连接到仪器上，用10倍柱体积的流动相清洗柱子（此时不要连接探测器，以防止固体颗粒进入流动池）。此时，如果柱压仍不降低，再次检查；

4.更换柱入口筛板。如果柱压降低，则表您的溶剂或样品结晶沉淀或含有颗粒杂质。正是这些杂质阻塞了筛板，导致压力上升。如果柱压仍然很高，请联系制造商。一般来说，在进样器和保护柱之间连接在线过滤器可以防止柱压过高的问题。

5.进样阀损坏：清洗或更换进样阀。

6.柱温过低：提高温度。

7.网上过滤器堵塞：清洗或更换网上过滤器。

8.流速设置过高：降低流速

9.压力传感器故障：更换液位传感器。

(2)柱压过低

1.液漏：确定液漏位置并进行维修。

2.液位传感器损坏：更换液位传感器。

3.泵头内有气体：溶剂除气：.启动泵抽出气体。

4.流速设置过低：调节流速。

5.柱温过高：降温。

(3)压力起伏

1.有溶解气体流动；超声波除气15-30分钟或充氦气除气

2.单向阀堵塞；取出单向阀，用超声波在纯水中超过20分钟，到处堵塞物

3..泵密封损坏，导致压力起伏；更换泵密封，更换泵密封

4..系统有液漏点；确定液漏位置并进行维修

5.柱后产生气泡；流通池出口加负压调节器

6.梯度洗脱：流动相粘度变化引起的压力起伏。

二.液漏

(1)接口处的液体泄漏

1.接头未拧紧；松开后再拧紧。手紧接头受手力限制。不要使用工具。不锈钢接头先用手拧紧，然后用专用扳手拧紧1/4-1/2圈。注意接头内的管道，否则会有死体积。

2.接头被污染或损坏；建议更换接头。

3.接头不匹配，建议使用同品牌的配件。

(2)泵液泄漏

1.单向阀松动：拧紧或更换单向阀。

2.松开接头：拧紧接头。

3.混合器密封损坏：更换混合器密封或更换混合器。

4.泵密封损坏:检修或更换泵密封。

5.液位传感器损坏：检修或更换液位传感器。

6.脉冲阻尼器损坏：更换脉冲阻尼器。

7.比例阀损坏：检查隔膜和手紧接头，如液漏立即更换。

8.排气阀损坏：拧紧排气阀，若损坏，更换排气阀。

(3)进样阀漏液

1..转子密封损坏；更换转子密封。

2..定量环堵塞；清洗或更换定量环。

3.进样口密封松动；调整松紧度。

4..进样针尺寸不合适，一般过短；使用适当的进样针（注意针形）。

5.废水管内产生虹吸；清空废水管。

6.废水管堵塞：更换或疏通废水管。

(4)高效液相色谱柱液泄漏

1.尾部接头松动：拧紧接头。

2.卡套内有填料：拆下：.清洗卡套.重装。

3.筛板厚度不合适：使用合适的筛板。

(5)检测器液漏

1.流通池垫片损坏：防止背景压力过大，更换垫片

2.流通池窗粉碎：更换窗口。

3.手紧接头液漏：拧紧或更换。

4.废水管堵塞：更换废水管。

5.流通池堵塞：更换。

三.谱图问题

(1)峰拖尾

1.筛板堵塞：反冲色谱柱.更换进口筛板。

2.色谱柱塌陷：添加色谱柱。

3..干扰物质的存在：使用较长的色谱柱.改变流动相或色谱柱。

4.流动相PH值不合适：调整PH值，对于偏碱化合物，低PH值更有利于获得对称峰。

5.样品与填料表面的活性点发生反应：加入离子对试剂，如流动相中含有铵盐加入碱挥发性装饰剂，如三乙胺，然后用酸调整到原来的PH(建议使用非挥发性磷酸)。

在流动相中加入适当的四氢呋喃，一般加入量在5%以内。

7.酸性或偏碱化合物峰拖尾：使用50-100浓度mM缓冲液；使用流动相相的缓冲液；PH等于PKa的缓冲液。

8.样品过载：减少进样量。

(2)峰前延

1.柱温低：上升柱温，最好不要超过40℃。

2.样品溶剂选择不当：采用流动相作为样品溶剂。

3.样品过载：降低样品含量。

4.色谱柱损坏：更换色谱柱。

5.流动相中缓冲盐浓度不足：增加缓冲盐浓度可增加离子强度，减少静电作用引起的前拖。

在流动相中加入适当的四氢呋喃，一般加入量在5%以内。

(3)峰分叉

1.保护柱或分析柱污染：取出保护柱，然后进行分析。如有必要更换保护柱。如果分析柱堵塞，请拆卸并清洗。如果问题仍然存在，可能是柱被强力保留物质污染，并采取适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能会堵塞，更换筛板或色谱柱。

2.样品溶剂不溶于流动相：改变样品溶剂，如有可能，以流动相为溶剂。

(4)峰值变形

样品过载：减少到适当的进样量。

(5)早出的峰变形

1.进样量不正确：减少进样量。

2.样品溶剂选择不当：使用流动相作为溶剂或使用较弱的溶剂。

(6)早出峰尾水平大于晚出峰尾水平

柱外效应：使用时间较短.内径较小的管道；使用小型流通池。

(7)K增加时，拖尾更严重

1.反相模式，二次保留效应：.加入三乙胺（碱性样品）；加入乙酸（酸性样品）；加入盐或缓冲剂（离子样品）；更换柱子。

2.正湘方式，二次保留效应：加入三乙胺（偏碱样品）；加入乙酸（酸性样品）；加水；

3.离子对，二次保留效应：加入三乙胺（偏碱样品）。

(8)额外峰值

1.上次进样洗脱峰：提高流速；增加运行时间或梯度斜率。

2.倒峰或鬼峰：检查流动相是否纯净；使用流动相作为溶剂；减少进样体积。

(9)保留时间起伏和突然变化

1.温度控制不当；调整柱温。

2.流动相成分变化；避免流动相挥发.做梯度时，要特别注意流动相混合的对称性

3.色谱柱不平衡；每次运行前给予足够的时间平衡色谱柱。

4.流速变化：再次设置流速。

5.泵中含有气泡：从泵中去除气泡。

6.流动相选择不当：更换合适的流动相。

(10)基线漂移

1.柱温起伏：控制柱与流动相的温度。

2.流动相不均：使用：HPLC水平溶剂、高纯盐和添加剂，流动相使用前除气。

3.检测器内的流通池被污染或有气体：用甲醇或其他强性溶剂清洗流通池

4.检测器出口堵塞：清除堵塞物或更换管道。

5.流动相配比不当或流速变化：改变配比或流速。

6.样品含有强保留物质(高保留物质)K‘值）将馒头的峰值样品洗掉，然后显示出逐渐上升的基线：必要时，在进样或研究过程中定期用强溶剂清洗柱子。

7.检测器未设置在最大吸收波长处：将波长调整到最大吸收波长处。

(11)分离度降低

1.流动相污染或变质(导致保留时间变化):重新配置流动相。

2.保护柱或分析柱堵塞：取出保护柱再分析，也可更换保护柱。如果分析柱堵塞，拆卸清洗，如果问题仍然存在，柱可能被强保留物污染，或入口堵塞，可以更换筛板或色谱柱。