C18柱因不同键合方式、粒径的不同、不同的长度、内径等因素表现出不同的选择性。这样市场上就有数百种不同选择特性的C18色谱柱。
对于传统的C18柱,pH值使用范围一般为2~7,因为pH值高于8时C18固定相会受到限制。由于残留硅羟基的存在,容易对碱性化合物造成不可逆的吸附,造成峰尾,影响分离分析。pH如果值太低,键合烷基就会脱落,成分的分离也不能满足要求。
1.酸性条件下C18柱的选择
为了改善C18柱在低pH值时的稳定性,有人提出了空间位阻的方法。
空间位阻作用是指连接大基团,阻碍溶质基团攻击硅醇基,使硅氧烷再生,提高化学键固定抗水解能力。
还有人在侧链中制备了异丙基或异丁基C18化学键合固定相。由于固定相引入了较大的侧链基团,三维阻碍了残留硅醇基和溶质之间的相互作用,在低中pH这种化学键合固定相更适合酸性物质的分离。
2.碱性条件下C18柱的选择
化学键合相一直是研究的热点。
每个硅烷化分子中含有两个硅原子,两个硅原子之间有两个硅原子-O-或-CH2-CH2等基团连接,每个硅原子含有一个C18官能团。其环状结构无论在低位都是低的pH在价值条件下,还是高的pH稳定性高,柱效满意。
与传统的单齿化学键合相比,这种化学键合固定相的突出优点是低、中、高pH值时稳定性好。C18双齿化学键合固定相的商品柱有ZorbaxExtend-C18色谱柱,其耐受性pH值达11.5、特别适合高pH强碱性化合物在流动相条件下进行有效的色谱分离。