测试制备柱分离性能的步骤如下:
①考虑到填料从分析级直接放大到制备级的因素,如果要净化大量化合物,需要考虑分析柱的规格和填料粒径(10µm或更大);作为下一步产品净化量较大的项目,必须考虑选择填料粒径较大、内径较大的色谱柱,在与分析柱相同的填料下净化产品。
②对分析柱(4.6mm内径或更小)选择性的研究,应在各种填料和色谱条件下进行选择。使用一些商品的液相色谱条件选择软件来比较各种色谱模式,从而缩短分离条件选择的时间。
③在得到良好的分离条件后,需要测试分析制备柱上样品的承载能力,比较各种样品量下产品的纯度,选择理想产物纯度的上样量。
④选择制备柱的规格,根据分析柱上获得的样品数据放大分离,通常选择与分析柱粒径相同的填料和色谱柱长度,以达到预测制备分离的预测。放大制备柱的样品量应根据制备柱与分析柱交叉截面积的比值进行选择。
⑤检查色谱分离结果、色谱馏出物的区域和纯度。