填料对色谱柱影响和导致寿命缩短原因

　　柱填料的物理性能对填料色谱行为有重要影响，填料主要的物理性能包括如下：颗粒度，孔径，孔体积，键合相化学，含碳量及烷基化处理。

　　（1）颗粒度是指柱填料的颗粒直径的大小，实际上色谱柱上所标的粒径是一个平均值，如粒径“5μm”并不是柱中填料所有的颗粒直径都是5μm，实际上有一个颗粒分布度，这种分布度对柱反压及柱效有重要作用，一般来说，平均颗粒度越小，颗粒分布度越小，色谱柱效越高，反压亦越高，目前C18柱色谱柱填料粒径在4～10μm之间。

　　（2）孔径是指填料颗粒间的孔间隙，一般所说的孔径是指填料的平均孔径，球形填料装柱后平均孔径分布比较窄，柱床结构均匀，柱效高，重现性好，无定形填料平均孔径分布较宽，柱床结构不均匀，流动相线性速度不均匀，谱带扩宽，平均孔径的大小对分离大分子化合物有较大的影响，在分离含有较大分子的样品时可能会有分子排阻效应，或产生吸附效应从而影响定量的回收率及准确度，色谱柱因而在用反相色谱分离诸如蛋白或多肽样品时应考虑选用大孔径(如30nm)的反相柱填料，孔体积作为硅胶多孔性的参数，在分离分析较大分子化合物时可作参考，选用较大孔体积的反相柱填料。

　　（3）化学键合相填料在高效液相色谱法中占有极重要的地位，它可以键合极性较大的有机基团，采用极性较小的溶剂作流动相，亦可键合极性较小的有机基团，选用极性较大的溶剂作流动相。

　　一种可能是由于流动相pH值超出建议范围而导致色谱柱塌陷，这也可能是由于色谱柱样品溶解在强酸或碱性溶液中引起的。

　　此外，还有一些色谱柱用于特定的项目，例如氨基柱与醛和酮会发生反应，在无缓冲的水溶液中的氨基柱会产生强碱性，导致部分硅胶溶解。

　　如果使用了错误的溶剂，色谱柱也会塌陷，原因是色谱柱从根本上说是非常松散的结构，它们通过颗粒彼此的粘附而部分地保持在一起，当将其置于能够破坏这种粘附力的流动相中时，塌陷的可能性就会增加，这偶尔会发生在中等极性溶剂中的氰基柱或THF中的苯基柱。

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