液相色谱柱使用方法及缓冲盐使用不当影响

　　高效液相色谱柱的正确使用包含：加装保护柱，过滤流动相和样品，净化样品，避免过高的柱压，注意温度和酸碱度，正确及时的冲洗等。

　　保护柱的作用是过滤掉来自流动相和样品的化学“拉圾”同时也可以有效除去流动相和样品中的不溶物，尽管现在的色谱仪在流动相吸入口，进样阀后部以及在色谱柱的两端都装有1，2μm等不同孔径的滤器，但滤器只能除去不溶性颗粒而不能除去化学污染，因此，加装保护柱是必要的，特别是在分析中药色谱柱，中成药等复杂混合物和生物样品时更是保护分析柱必不可少的措施。

　　流动相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成，原则上，所有经过色谱柱的流动相均应过滤，但在实际操作上应视具体情况而有所区别:当有机溶剂用色谱纯级，水用石英亚沸水或其它超纯水时，在能确保水和有机溶剂的质量且没有受到污染时，过滤并无更多实际意义。

　　当样品中含有对色谱柱有损害的化学成分，如产生永久性吸附的蛋白质，糖等有机分子和强吸附性物色谱柱质，以及可能对柱填料产生破坏作用的基团离子，在进样前应尽可能对样品进行分离提纯以除去多余杂质组分。

　　在液相色谱分析过程中，常常需要使用缓冲盐来调解流动相的pH值，缓冲盐的恰当选择能够改善分离效果和峰形，若是对缓冲盐选择和使用不当，对色谱柱可能造成一些影响。

　　缓冲盐使用不当对色谱柱的影响及其正确使用方法。

　　我们可以从柱压升高，柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等方面来分析原因：。

　　色谱柱（1）柱压升高。

　　原因：缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，会堵塞色谱柱两端的塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，从而引起柱压升高。

　　（2）柱效下降。

　　原因：a）有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降，b）凝结在键合相表面，使C18碳链难以舒展，对物质的保留能力下降，导致柱效下降，因此用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗，水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。

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