液相色谱柱简介和柱长及内径的选择

　　色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏，对色谱柱的要求是柱效高，选择性好，分析速度快等，市售的用于HPLC的各种微粒填料好多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相，氧化铝，有机聚合物微球（包括离子交换树脂），多孔碳等，其粒度一般为3，5，7，10um等，柱效理论值可达5～16万／米。

　　对于一般的分析只需5000塔板数的柱效，对于同系物分析，只要500即可，对于较难的分离物质对则可采用高达2万的柱子，因此一般色谱柱10～30cm左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。

　　柱效受柱内外因素影响，为使色谱柱达到最佳效率，除柱外死体积要小外，也要有合理的柱结构（尽可能减少填充床以外的死体积）及装填技术。

　　即使最好的装填技术，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的，靠近管壁的部位比较疏松，易产生沟流，流速较快，影响冲洗剂的流形，使谱带加宽，这就是管壁效应，这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍料径的厚度，在一般的液相色谱系统中，柱外效应对柱效的影响色谱柱远远大于管壁效应。

　　柱长及内径的选择：。

　　长度的选择：柱越长，总柱效越高(n值越大)，柱越长，分析时间也越长，250—300mm是最普遍的柱长，实验室一半以上的工作都是采用此规格柱子，一般用来分离l0到50个组份的中等至复杂混合物，500—600mm，要求较高分辨率的应用，—般用来分离大于50个组份或包含有难分离物质的复杂样品程序升温分析。

　　内径：柱效率与柱半径平方成反比，内径越小柱效越高，但内径越大，柱容量也增加，允许进样量就越多，色谱柱当进样量超过柱容量时，则因柱内每块理论板内不能建立真正的平衡，将会导致色谱蜂畸变，柱分辨率降低，重现性不好，因此对于复杂样品需要精确分离，必须使用小内径柱子，另一方面若样品中存在具有很不相同浓度组份化合物，为了增加样品容量就必须使用内径大的柱子，目前实验室使用最常见的柱子内径一般是4.6mm。

　　一般选择原则：分析大分子量化合物选择大孔径色谱柱，对于高pH值或者碱性化合物需要选择高封端或者特殊封端的色谱柱，以改善峰形，延长色谱柱使用寿命等。

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